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文档简介
1、甘油氧化酶(GlycerolOxidase,GLOX)在氧气存在的情况下,可将甘油氧化为甘油醛,同时产生过氧化氢。甘油氧化酶可以替代甘油激酶和甘油磷酸氧化酶对血液中甘油三脂进行测定。甘油氧化酶还可将乙二醇经由羟乙醛氧化为乙二醛,可将乙醇酸氧化为乙醛酸。因为酶催化反应的速度快,无副产品产生,如将其用于工业生产乙二醛和乙醛酸,具有广泛的应用前景。 本研究从一株产甘油氧化酶的日本曲霉(AspergillusjaponicusSaito
2、)As8586出发,首先对其发酵条件进行了一系列的研究,然后分别通过紫外线和亚硝基胍诱变,获得一株相对稳定高产的诱变菌株Aj100015,其酶活力达到2.1U/ml;最后设计单因子实验和正交实验对原始培养基进行了优化,结果在含4%甘油,0.4%酵母浸膏,0.13%K2HPO4,0.05%KCl,0.1%MgSO4,0.018%FeSO4,0.1%玉米浆,初始pH为6.2的培养基中,于30℃,200转/分的转速下,培养48小时,产生的甘油
3、氧化酶活力最高,达到4.1U/ml。 通过收集菌体,高压破碎,硫铵盐析,SephadexG-25凝胶过滤,QSepharoseHP离子交换,SephacrylS-300凝胶过滤层析对甘油氧化酶蛋白进行了分离纯化,并通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳确定其分子量为416KD,经SDS-PAGE确定其由八个分子量约为52.3KD的亚基组成。等电聚焦电泳测得其等电点为4.9。 甘油氧化酶在以甘油为底物时,最适作用温度为37℃,最适p
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